Le principe de la microscopie à feuillet de lumière en fluorescence
La microscopie à feuillet de lumière en fluorescence (LSFM) divise l’excitation et la détection de la fluorescence en deux trajets lumineux séparés, l’axe d’illumination étant perpendiculaire à l’axe de détection. Vous pouvez donc éclairer une seule coupe mince de l’échantillon à la fois, et générer une coupe optique inhérente en excitant uniquement la fluorescence provenant du plan en plein champ. Aucun sténopé ni traitement d’image n’est requis. La lumière provenant du plan en plein champ est collectée sur les pixels d’une caméra, plutôt que pixel par pixel comme, par exemple, dans des approches de microscopie confocale ou à balayage laser. La mise en parallèle de la collecte des images sur une caméra vous permet de collecter des images plus rapidement et avec moins de lumière d’excitation qu’en utilisant de nombreuses autres techniques de microscopie. L’imagerie 3D devient extrêmement rapide et offre un rendement lumineux très élevé.
Le découplage de l’optique de détection et de l’optique d’illumination permet une excitation de fluorescence avec des lentilles dédiées à faible ouverture numérique, sans sacrifier la résolution de détection et la sensibilité. Grâce à ce principe de fonctionnement, le LSFM est idéal pour l’imagerie d’échantillons à l’échelle millimétrique, tels que des organismes en développement ou de grands échantillons de tissus transparisés.